基于质谱检测转基因生物外源蛋白质的消化稳定性

• 作者: 何昆 夏晴 孙兴 毛劼 王心正 王红霞 程娟献 赵永强
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 转基因生物 消化稳定性 质谱 外源蛋白Cry1Ab/1Ac 无标记定量
• 年，卷（期）: 2016,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 64-69
• 页数: 6页
• 分类号: TS207.3
• 字数: 5714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201619011

摘要

基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质，经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离，切取目标蛋白质条带进行酶切，提取肽段进行纳升液相色谱-电喷雾串联质谱分析。基于Mascot数据库检索鉴定目标蛋白质。计算各消化时间点蛋白质匹配肽段数与消化前蛋白质匹配肽段数的比值，当比值≤0.50时判断为目标蛋白质在该时间段内已消化。将此方法应用于转基因抗虫水稻“华恢1号”外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化稳定性分析，结果显示在模拟胃液中消化2 min时，比值下降到0.50以下，在模拟肠液中消化15 s后比值下降到0.50以下，表明该蛋白在胃/肠消化液中具有消化不稳定性。