屎肠球菌ORF5基因缺失株的构建及鉴定

• 作者: 杨晓燕 熊建英 肖钘 陈武嘉 韩泽平
• 来源期刊: 中华医院感染学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 屎肠球菌 ORF5 基因缺失 自杀质粒
• 年，卷（期）: 2016,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4869-4872
• 分类号: R378
• 语种: 中文
• DOI: 10.11816/cn.ni.2016-161132

摘要

目的 构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据.方法 通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD442,将重组质粒电转化入屎肠球菌中,通过卡纳霉素以及菌落PCR筛选得到ORF5基因缺失株,进行PCR以及测序鉴定;比较突变株与野生株体外生存能力以及对膀胱癌细胞的粘附率.结果 利用重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,并连接至PCVD442自杀质粒;重组自杀质粒进入屎肠球菌后出现了同源重组事件,ORF5基因被卡纳霉素基因替代,通过PCR及测序分析证实基因组ORF5基因已敲除;通过细胞培养证实野生株对膀胱癌细胞的粘附率高于突变株.结论 成功构建屎肠球菌ORF5基因突变株,突变株黏附膀胱癌细胞能力减弱,初步证实ORF5基因与屎肠球菌的致病力有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩泽平	广州市番禺区中心医院检验科	25	49	4.0	5.0
2	杨晓燕	广州市番禺区中心医院检验科	15	44	4.0	5.0
3	陈武嘉	广州市番禺区中心医院检验科	8	27	3.0	4.0
4	肖钘	广州市番禺区中心医院检验科	4	20	2.0	4.0
5	熊建英	广州市番禺区中心医院检验科	1	1	1.0	1.0