scFv-LAA0融合蛋白的制备及对人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用观察

• 作者: 何光志 刘茜明 杨光勇 郭海涛
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 抗白介素4受体单链抗体 竹叶青蛇毒LAAO 白细胞肺肿瘤 肺腺癌 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2016,（47）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11|Q789|Q939.48
• 字数: 3443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.47.002

摘要

目的：制备重组抗白介素4受体（IL-4R）单链抗体基因与竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶（LAAO）的融合蛋白（scFv-LAAO融合蛋白），并观察其对人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用。方法①采用重叠延伸PCR技术将抗IL-4R单链抗体与竹叶青蛇毒LAAO基因连接成scFv-LAAO融合基因，构建重组质粒pET28a-scFv-LAAO，转染BL21（DE3）原核表达菌，诱导表达scFv-LAAO融合蛋白，用SDS-PAGE法检测scFv-LAAO融合蛋白的分子量，用Western blotting法检测scFv-LAAO融合蛋白的His-tag表达。②设空白对照组、环磷酰胺组和融合蛋白组（包括高、中、低剂量融合蛋白组），分别用培养基、2．0 mg／mL环磷酰胺及4．0、2．0、1．0 mg／mL的scFv-LAAO融合蛋白培养人肺腺癌H460细胞，用MTT法测算环磷酰胺组和高、中、低剂量融合蛋白组细胞增殖抑制率。取75只小鼠，建立荷肺腺癌动物模型，随机分为空白对照组、环磷酰胺组和融合蛋白组（包括高、中、低剂量融合蛋白组），分别腹腔注射生理盐水、0．1 mL／10 g体质量的环磷酰胺和100、50和20 mg／kg的scFv-LAAO融合蛋白，1次／d，连用10 d后停药，停药7 d后称量各组小鼠瘤重，计算环磷酰胺组和高、中、低各剂量融合蛋白组抑瘤率；同时统计存活时间。结果 scFv-LAAO融合基因长度2000～3000 bp。用融合基因转染BL21（DE3）原核表达菌后，将细菌裂解从裂解液中分离出的蛋白分子量86 kD，与scFv-LAAO融合蛋白分子量相符，且用Western blotting法在分离到的蛋白中检出scFv-LAAO融合蛋白组氨酸标签。环磷酰胺组和高剂量融合蛋白组人肺腺癌H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间相比，P均＞0．05；环磷酰胺组和高剂量融合蛋白组H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间高于低、中剂量融合蛋白组，P均＜0．05；低剂量融合蛋白组H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间低于中剂量融合蛋白组，P均＜0．05。结论成功制备scFv-LAAO融合蛋白。scFv-LAAO融合蛋白可以抑制人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何光志		65	154	7.0	10.0
2	杨光勇		18	37	4.0	6.0
3	郭海涛		10	23	3.0	4.0
4	刘茜明		14	18	3.0	4.0