慢病毒GV115-AIF siRNA重组表达系统的构建及鉴定

• 作者: 胡有谷 赛佳明 邱晨生 陈伯华 马学晓
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒 凋亡诱导因子(AIF) RNA干扰 基因治疗
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1636-1638,1653
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.09.009

摘要

目的:构建高效的慢病毒GV115-AIF siRNA重组表达系统.方法:根据目的基因AIF以及RNA干扰序列设计原则,利用设计软件设计了3个可能的AIF siRNA序列.应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-AIF siRNA重组质粒,并采用聚合酶链反应技术(PCR技术)和基因测序技术对GV115-AIF siRNA重组质粒鉴定.利用GV115病毒包装辅助pHelper1.0质粒和pHelper 2.0质粒进行病毒包装.病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用逆转录定量PCR技术(RT-PCR技术)检测转染后对人胚肾293T细胞中AIF基因的敲减效率,筛选最高效的AIF siRNA基因序列.结果:GV115-AIF siRNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带.测序结果与设计的基因序列完全吻合.3个可能的AIF siRNA序列中基因敲减效率最高的可达到88.3％.结论:成功构建高效的慢病毒GV115-AIF siRNA重组表达系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马学晓	青岛大学附属医院脊柱外科	50	100	6.0	7.0
2	胡有谷	青岛大学附属医院脊柱外科	120	1086	17.0	28.0
3	陈伯华	青岛大学附属医院脊柱外科	111	468	10.0	18.0
4	赛佳明	青岛大学附属医院脊柱外科	5	3	1.0	1.0
5	邱晨生	青岛大学附属医院脊柱外科	8	2	1.0	1.0