IRE1-XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究

• 作者: 刘一鸣 刘燕 李金政 程黎 胡大仁 苟剑林 龚建平
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: X 盒结合蛋白 1 肝巨噬细胞 极性调节
• 年，卷（期）: 2016,（17）
• 所属期刊栏目: ?论 著?
• 页码范围: 2314-2318
• 页数: 5页
• 分类号: R392.4
• 字数: 5035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.17.004

摘要

目的：分离、培养 LEWIS 大鼠肝脏肝巨噬细胞（KCs），观察肌醇酶1-X 盒连接蛋白1（IRE1-XBP1）通路活性改变对KCs 功能的调控的作用机制。方法（1）采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离 Lewis 大鼠 KCs ；（2）鉴定后的KCs 分为4组：XBP1沉默组（XBP1-shRNA 组）、错义序列沉默对照组（Ctrl-shRNA 组）；Adv-XBP1过表达组（AdV-XBP1组）、错义序列过表达对照组（Ctrl-AdV 组）；（3）实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测各组 KCs 中 XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17转录水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 JAK1、JAK2、STAT1及 STAT3的蛋白表达水平；（4）流式细胞术（FCM ）及激光共聚焦检测各组 KCs 表型的变化情况；（5）分离大鼠脾脏淋巴细胞，尼龙毛柱过滤纯化 T 细胞，与上述各组 KCs 共培养，Brdu 渗入法检测T 细胞增殖情况；（6） Annexin V ／PI 法 FCM 观察 T 淋巴细胞凋亡情况；（7）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中 IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及 IL-10水平。结果（1）RT-PCR 结果显示，XBP1-shRNA 组中 XBP1的表达量较对照组显著降低，而在 Adv-XBP1组则明显上调（P＜0．05）；（2）FCM 发现，XBP1-shRNA 组中 M HC-Ⅱ、CD86、CD40的表达明显低于对照组，而 CD204和CD206的表达则显著高于对照组；而在 Adv-XBP1组，则呈相反趋势；（3）Western blot 检测发现 XBP1-shRNA 组中 JAK1、JAK2、STAT1和 STAT3的蛋白表达及其磷酸化水平均受到抑制，而在 Adv-XBP1组则上述蛋白的表达及磷酸化水平得到显著增强；（4）Brdu 发现抑制 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖受到明显抑制，凋亡增加，促炎细胞因子分泌减少，抗炎细胞因子分泌增加（P＜0．05），而上调 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖则明显增强，凋亡明显减少，促炎细胞因子分泌增加，抗炎细胞因子分泌减少（P＜0．05）。结论 KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以转化 KCs 的极性状态，并通过调节 JAK-STAT 家族成员表达，调控 KCs 自分泌细胞因子的组成成分；KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以影响共培养初始 T 淋巴细胞的增殖分化、凋亡及相关细胞因子的分泌。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚建平	重庆医科大学附属第二医院肝胆外科	438	2018	18.0	27.0
2	程黎	重庆三峡中心医院肝胆外科	8	22	3.0	4.0
3	苟剑林	重庆三峡中心医院肝胆外科	10	38	4.0	6.0
4	刘燕	重庆三峡中心医院肝胆外科	17	44	4.0	6.0
5	胡大仁	重庆三峡中心医院肝胆外科	8	14	2.0	3.0
6	李金政	重庆医科大学附属第二医院肝胆外科	13	29	3.0	4.0
7	刘一鸣	重庆医科大学附属第二医院肝胆外科	9	7	1.0	2.0