脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析

• 作者: 姜宁 李健春 王丽 王琼
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 原核表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2016,（20）
• 所属期刊栏目: ?论 著?
• 页码范围: 2737-2739
• 页数: 3页
• 分类号: R346
• 字数: 3142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.20.001

摘要

目的：构建含有脑源性神经营养因子（BDNF）的原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF及相应的原核表达菌，经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后研究其生物学活性。方法按照大肠杆菌BL21（DE3）的密码子偏好性进行密码子优化，人工合成大鼠BDNF的基因序列并构建原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF。经限制性内切酶（Bam HI ，Hind Ⅲ）酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后，用SDS‐PAGE检测重组蛋白的表达情况，以BDNF特异性抗体采用Western blot法鉴定BDNF蛋白抗原性，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测BDNF蛋白对 PC12细胞活力的影响。结果构建的pET28a（＋）／BDNF经双酶切和测序鉴定与设计序列100％一致；工程菌经IPTG诱导后在相对分子质量17×103左右有1条明显蛋白条带，Western blot显示目的蛋白能够与特异性BDNF抗体反应；不同浓度BDNF蛋白处理组与对照组比较细胞活力均有不同程度的增加，其中50 ng／mL BDNF处理组效果最优。结论成功构建原核表达质粒pET28a（＋）／BDNF及相应的原核表达菌，该工程菌表达的BDNF蛋白具有良好的生物学活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琼	西南医科大学药学院	25	117	4.0	10.0
2	姜宁	西南医科大学药学院	1	0	0.0	0.0