人肾脏相关基因Nox4过表达慢病毒载体的构建与定位检测

• 作者: 孙文娟 孙脊峰 李占亭 杜德伟 杨峰
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: Nox4 慢病毒载体 ROS
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 230-234
• 分类号: Q95|Q75|R587.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.02.008

摘要

目的:克隆Nox4基因入pLenti6.3慢病毒表达载体,为探索Nox4基因在ROS产生中的作用提供实验基础.方法:根据NCBI人Nox4 mRNA序列设计引物,再利用酶切连接反应将Nox4插入到入门载体pENTR3C中,成功构建pENTR3C-Nox4后,通过LR反应,将Nox4和EGFP tag插入到慢病毒表达载体pLenti6.3中,经酶切和测序验证正确后,将重组表达质粒转染入人Hela细胞,通过Western-Blot验证Nox4的表达情况,免疫荧光验证Nox4在细胞内的定位情况.结果:入门载体及表达质粒测序比对完全正确,转染Hela细胞后可见明显的表达条带,并且主要定位于细胞器内质网中.结论:成功构建了带有EGFP tag的Nox4基因慢病毒重组表达载体,转染Hela细胞后,其能正确表达并定位于内质网中,为研究Nox4在调节ROS产生中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜德伟	第四军医大学唐都医院肾脏内科	49	308	10.0	15.0
2	孙脊峰	第四军医大学唐都医院肾脏内科	67	330	10.0	16.0
3	李占亭	第四军医大学唐都医院肾脏内科	26	124	5.0	10.0
4	杨峰	第四军医大学唐都医院肾脏内科	12	16	3.0	3.0
5	孙文娟	第四军医大学唐都医院肾脏内科	6	9	2.0	3.0