人LOX-1基因毕赤酵母表达载体的构建与表达研究

• 作者: 于田田 刘京 李敬达 李明英 王晓 迟彦 陈勇 陈玉华 陶娅妮
• 来源期刊: 中国当代医药
• 学科: 医学
• 关键词: 血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 真核表达载体构建 毕赤酵母 动脉粥样硬化
• 年，卷（期）: 2016,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-6,10
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 2650字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)真核表达载体,筛选高表达菌株,为体外获得有活性重组蛋白奠定基础.方法 以实验室保存的含有人源LOX-1基因的质粒为模板PCR扩增LOX-1基因,经过TA克隆后亚克隆至酵母表达载体pPICZαA,将获得的重组质粒电转化至毕赤酵母X-33,利用原位双膜法快速检测阳性高表达菌株,最后经过甲醇诱导,采用Western blot检测LOX-1的表达.结果 成功构建LOX-1真核表达载体,双膜法筛选到高表达菌株;Western blot结果显示,LOX-1在上清中得到表达.结论 LOX-1基因在毕赤酵母细胞上清中得到表达,为体外获得活性重组蛋白和研究其致动脉粥样硬化功能奠定基础.