EMA-qPCR方法快速检测番茄溃疡病菌活菌研究

• 作者: 周大祥 熊书
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 番茄溃疡病菌 叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA) 实时荧光定量PCR(qPCR)
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 植物保护·土壤肥料
• 页码范围: 99-104
• 页数: 6页
• 分类号: Q93-33
• 字数: 4099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2017.1.018

摘要

将叠氮溴乙锭(EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-qPCR),建立一种有效快速检测番茄溃疡病活菌的方法.以番茄溃疡病菌Pat-1基因为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行qPCR特异性扩增.结果显示,qPCR检测灵敏度为1.0×101CFU/mL;当EMA的浓度为2.0μg/mL时,能有效抑制1.0×107 CFU/mL灭活死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响.当活菌数在1.0×101-1.0×105 CFU内,每个qPCR反应体系中活菌CFU数与Ct值呈线性相关(R2 =0.987).不同温度处理后EMA-qPCR检测番茄溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,表明待检样品可在4和20℃短期保存.对疑似带病番茄种子样品进行EMA-qPCR检测,发现EMA-qPCR方法能减少番茄溃疡病菌PCR检测的假阳性结果.本研究建立的EMA-qPCR方法是一种能有效检测番茄溃疡病活菌的方法,并能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周大祥	重庆三峡学院生命科学与工程学院	39	159	7.0	11.0
5	熊书	重庆三峡医药高等专科学校基础医学部	29	57	4.0	6.0