草鱼SREBP-1-3'-UTR双荧光素酶报告载体构建及miR-33对其表达的影响

• 作者: 卢荣华 孙君君 常志光 杨峰 王俊丽 秦超彬 聂国兴
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 SREBP-1 miR-33 3'非翻译区 pmirGLO报告基因载体 荧光素酶活性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 17-22
• 分类号: S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.12024/jsou.20160301713

摘要

为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3’端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的双荧光素酶报告基因载体.首先用PCR法获得SREBP-1 mRNA含miR-33 结合位点的3'UTR序列(379 bp),与双荧光素酶报告载体pmirGLO重组后转染DH5α感受态细胞.然后经 筛选和双酶切鉴定,获得含有SREBP-1基因3’-UTR的双荧光素酶报告载体:pmirGLO-SREBP-1-3'-UTR.最后在草鱼肝细胞L8824共转染miR-33mimics和pmirGLO-SREBP-1-3’-UTR,明确miR-33与SREBP-1基因3'UTR区的靶向关系.结果表明,含有SREBP-1基因3’-UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建成功,PCR、双酶切和基因测序证明序列与目标一致;转染pmirGLO-SREBP-1-3’-UTR的L8824细胞可表达荧光素酶,单独转染载体组的荧光素酶活性显著高于共转染载体和miR-33 mimics组(P＜0.05).本研究证实草鱼SREBP-1是miR-33的直接靶基因,miR-33通过和SREBP-1 mRNA 3'UTR结合,调控SREBP-1基因的转录后表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂国兴	河南师范大学水产学院	165	1275	18.0	30.0
2	王俊丽	河南师范大学生命科学学院	44	518	12.0	21.0
3	卢荣华	河南师范大学水产学院	28	58	5.0	7.0
4	孙君君	河南师范大学水产学院	7	33	3.0	5.0
5	杨峰	河南师范大学水产学院	10	38	4.0	6.0
6	常志光	河南师范大学水产学院	2	9	2.0	2.0
7	秦超彬	河南师范大学水产学院	12	24	3.0	4.0