SUSD2基因干扰表达载体的构建及在A549细胞中鉴定

• 作者: 危敏 叶华秀 蔡翠霞
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: SUSD2基因 短发夹RNA 载体构建 A549细胞 非小细胞肺癌
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-21,16
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.01.0003

摘要

[目的]构建SUSD2基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞中鉴定.[方法]设计合成SUSD2基因shRNA片段,连接到经BamH I和EcoR I双酶切的psi-mHH1 shRNA载体中,构建干扰表达载体psi-mH1-SUSD2 shRNA,酶切后测序鉴定;将干扰载体psi-mHH1-SUSD2 shRNA转染A549细胞,荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法检测干扰载体的干扰效率.[结果]酶切和测序结果显示成功构建了SUSD2基因shRNA的表达载体,q-PCR和Western Blot结果显示最佳干扰载体可使SUSD2 mRNA相对表达量下调75％以上,并可明显抑制A549细胞中SUSD2蛋白的表达.[结论]成功构建了SUSD2基因干扰表达载体,并在A549细胞中有效干扰SUSD2基因的表达.