盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 吴晓燕 张玲玲 彭喆 徐绍建 徐胜男 战翔 时建立 郑书轩 黄保华
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 盐酸克伦特罗 单克隆抗体 残留检测
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 91-95,105
• 页数: 6页
• 分类号: S851.34
• 字数: 5089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2017.02.027

摘要

为进一步建立克伦特罗(CL)残留检测方法,给制备CL残留检测试剂盒打下基础,进行了CL单克隆抗体(McAb)的制备研究.以重氮反应,将CL与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和检测原,并通过杂交瘤技术,获得了5株能稳定分泌特异结合CL小分子的单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E9A9、2A9C1、3F2E9、6G2E9、6E10D9).这5株细胞株经过体外传代培养和冻存复苏后均能稳定分泌抗体.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的这5株细胞上清液抗体效价分别为1:1.28×105、1:5.12×105、1:1.28×105、1:5.12×105、1:2.56×105;选用3F2E9、6E10D9细胞株,制备CL单克隆抗体腹水并纯化,其纯化后的腹水抗体效价分别为1:1.28×105、1:2.56×105,BCA(2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠)方法检测的浓度分别为1.60 mg/mL、1.54 mg/mL;最终通过斑点ELISA(Dot-ELISA)方法测定CL抗原与这2株抗体有较强的结合力.在上述方法的制备及验证下,成功获得了特异性较高的CL单克隆抗体,为进一步研制CL残留检测试剂盒奠定了基础.