基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究

• 作者: 丁建祖 丁豪杰 孔庆明 楼涤 郑斌 陆绍红 陈睿
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 关键词: 日本血吸虫 虫卵抗原 纳米抗体 胶体金免疫层析方法
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 205-211
• 页数: 7页
• 字数: 4347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2017.04.001

摘要

为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白 (VHH-48、VHH-52) 并以NI-NTA亲合层析纯化.以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA) 和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度.采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法.以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性.结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体.胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10 μg/mL,最适pH分别需要加入16和12 μL体积的0.2 mol/L K2CO3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合.对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性.本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	楼涤	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	35	134	6.0	10.0
2	陆绍红	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	33	164	7.0	12.0
3	陈睿	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	35	189	7.0	13.0
4	丁建祖	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	29	148	7.0	11.0
5	孔庆明	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	9	26	2.0	4.0
6	郑斌	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	7	28	2.0	5.0
7	丁豪杰	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	1	1	1.0	1.0