咖啡驼孢锈菌PCR分子检测体系的建立

• 作者: 习金根 吴伟怀 易克贤 李乐 李锐 梁艳琼 汪涵 贺春萍 郑金龙 黄兴
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 咖啡 咖啡驼孢锈菌 PCR 分子检测
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 1677-1681
• 页数: 5页
• 分类号: S763.15
• 字数: 4108字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.09.016

摘要

由专性寄生菌咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)引起的咖啡叶锈病是影响咖啡产量的最主要真菌病害.为建立对咖啡驼孢锈菌具有高特异性、高灵敏度、易操作的分子检测方法,本研究通过对咖啡驼孢锈菌DNA核糖体转录间隔区ITSI～ITS4序列与其近源序列作多重比较分析,获得其特异性区域,并于特异性区域设计了1对引物Hv-ITS-F/R.利用该特异引物,通过对咖啡驼孢锈菌、咖啡褐斑病菌、咖啡锈菌重寄生菌、咖啡炭疽菌以及不同属其它真菌基因组DNA进行PCR扩增.结果表明:此引物对仅能从咖啡驼孢锈菌基因组DNA中扩增出396 bp的特异条带,对其它相似或相近的病原真菌则无扩增条带.灵敏度试验结果表明,在DNA水平上检测浓度可达10 pg/μL.进一步通过田间健康与疑似发病植株的检测,结果呈现出很好的应用前景.由此表明,该引物对能有效地用于咖啡组织中驼孢锈菌的检测.