人白细胞介素2受体β(IL-2RB)基因真核表达及与JAK1的相互作用的检测

• 作者: 刘天才 吴涵韬 吴英松 李坤 王刚 邓巧亭 郭欣欣
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 白介素2受体β(IL-2RB) 真核表达 免疫共沉淀 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.01.0005

摘要

[目的]构建含人白介素2受体β(IL-2RB)基因的真核表达质粒pENTER-IL-2RB-His,并在293T中进行真核表达,并用免疫共沉淀检测JAK1与IL-2RB在细胞内的相互作用.[方法]在Hela细胞中提取人总RNA,通过RT-PCR获得人IL-2RB的基因全长,并将其克隆至真核表达载体pENTER-His中.经PCR克隆,双酶切、测序鉴定后,将重组质粒pENTER-IL-2RB-His转染至293T细胞中.免疫印迹法检测不同时间点的IL2RB蛋白(24 h、36 h、48 h)在293T细胞中的表达,用免疫共沉淀检测JAK1和IL-2RB蛋白之间的相互作用.[结果]经PCR克隆、双酶切、测序鉴定质粒克隆正确.免疫印迹可见61 kDa的目的蛋白.共同转染JAK1和IL-2RB的质粒,免疫印迹可见分别为133 kDa和61 kDa的目的条带.[结论]成功获得IL-2RB基因全长,成功构建pENTER-IL-2RB-His真核表达质粒,并在293T细胞中成功表达,随着时间的推移其表达量增高.免疫共沉淀可以检测到JAK1和IL-2RB两者的蛋白相互作用,这为下一步研究JAK1和IL-2RB这一对蛋白的相互作用的作用方式及作用机制奠定了基础.