改良的人视网膜Müller细胞的原代培养方法与鉴定

• 作者: 唐仕波 林少芬 毛羽翔 谢满云
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 视网膜/细胞学 神经胶质细胞 细胞培养 人 Müller细胞
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 22-25
• 页数: 4页
• 字数: 3851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.01.005

摘要

背景 视网膜Müller细胞是视网膜重要的胶质细胞,也是视网膜干细胞的来源之一,研究Müller细胞的生物学行为对研究视网膜的各种生理病理过程和视网膜干细胞治疗研究具有重要意义,而建立稳定的视网膜Müller细胞培养体系是相关研究的基础. 目的 优化分离培养和纯化人视网膜Müller细胞的方法,为相关的实验研究提供良好优质的Müller细胞来源. 方法 分离人供体眼视网膜组织,然后将剪碎的视网膜组织置入质量分数0.25％胰蛋白酶+100 U透明质酸酶混合溶液中进行消化,添加含体积分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养液1～2 ml终止消化,然后加入含体积分数20％胎牛血清的RPMI1640培养液培养72 h,行半量换液,再以含10％胎牛血清的培养液进行传代.光学显微镜下根据细胞的形态特征进行细胞鉴定,并分别采用免疫荧光技术和免疫组织化学法检测胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Müller细胞特异性标志物谷氨酰胺合成酶(GS)的表达,对培养的细胞进行鉴定.结果 应用0.25％胰蛋白酶+100 U(商品单位)透明质酸酶的混合酶消化法可成功获取人视网膜Müller细胞,原代培养后24 h细胞贴壁,培养后9～1Od细胞融合.培养的细胞胞体呈长圆形,细胞质丰富,部分细胞体两端锥状长突起,末端膨隆,细胞核大.传代后的细胞胞体大,呈扁平多角形,符合Müller细胞的形态.细胞免疫组织化学和免疫荧光技术检测显示95％以上的细胞中GFAP呈阳性表达,90％以上的细胞中GS呈强阳性表达. 结论 应用透明质酸酶和胰蛋白酶混合液消化法可以成功分离人视网膜Müller细胞,分别用含20％胎牛血清和含10％胎牛血清的RPMI1640培养液培养和传代的人视网膜Müller细胞产量高且纯度好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛羽翔	中山大学中山眼科中心	28	129	7.0	10.0
2	林少芬	中山大学中山眼科中心	33	140	7.0	10.0
3	唐仕波	中南大学爱尔眼科学院	11	46	4.0	6.0
4	谢满云	中南大学湘雅二医院眼科	1	2	1.0	1.0