反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒1b和2a基因型检测

• 作者: 刘金霞 孙殿兴 赵娜
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) 中国 1b基因型 2a基因型 反转录环介导等温扩增
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 肝炎研究专题论著
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文

摘要

利用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)对中国主要的丙型肝炎病毒(HCV) 1b和2a基因型进行扩增.首先,收集临床采样标本,对其进行定量和定性.第二,分别根据HCV 1b和HCV 2a序列的5’非转录区(5'UTR)设计相应的RT-LAMP引物.第三,利用与非特异模板的交叉反应以评价各引物的特异性,利用内切酶酶切产物以进一步保证扩增准确.第四,利用倍比稀释的模板以评价各引物的灵敏性,并用依赖钙黄绿素/Mn2+的可视化方法与电泳结果比较.最后,利用RT-LAMP对所有采样标本进行HCV 1b和HCV 2a两组平行反应,SPSS统计学软件对其实用性初步评价.结果显示,所设计的RT-LAMP引物特异性好,HCV 1b和HCV 2a型产物大小均与预期相同.最低可检测的模板量为100 IU/mL,且可视化染色方法电泳结果相一致.统计学软件比较扩增结果表明RT-LAMP与实时荧光定量PCR之间没有统计学差异(P＞0.05).综上,RT-LAMP设备简单,操作简便,具有在基层医疗机构的应用前景.