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美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7的原核表达及免疫原性分析
美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7的原核表达及免疫原性分析
作者:
丁耀忠
张杰
张永光
欧云文
王俊
马小元
马炳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)
美洲型
ORF7基因
原核表达
免疫原性
摘要:
猪(Sus scrofa)繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是造成猪出现繁殖与呼吸障碍症状的主要病原之一,N蛋白作为该病毒主要的结构蛋白和抗原蛋白.为了研究美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(NA-PRRSV)N蛋白的免疫原性,本研究以NAPRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增获得372 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-NA-PRRSV-ORF7重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3);在37℃,以1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性;复性后重组N蛋白作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔(Oryctolagus cuniculus),采用Western blot检测兔血清抗体特异性.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析表明,该ORF7编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为24 kD;Western blot检测结果表明,该重组N蛋白与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,与猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type1,PPVl)和PCV2猪血清不发生交叉反应,制各的NA-PRRSV兔抗血清与重组N蛋白发生特异性反应.该实验成功构建了NA-PRRSV-ORF7原核表达载体,实现了ORF7基因在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的免疫原性,为NA-PRRSV检测方法建立或试剂盒的开发提供了理论依据.
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达和间接ELISA方法的建立
猪繁殖与呼吸综合征病毒
N蛋白
重组表达
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文献信息
篇名
美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7的原核表达及免疫原性分析
来源期刊
农业生物技术学报
学科
农学
关键词
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)
美洲型
ORF7基因
原核表达
免疫原性
年,卷(期)
2017,(2)
所属期刊栏目
研究论文与报告
研究方向
页码范围
267-273
页数
7页
分类号
S855.3
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1674-7968.2017.02.011
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美洲型
ORF7基因
原核表达
免疫原性
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
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农业生物技术学报
主办单位:
中国农业大学
中国农业生物技术学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1674-7968
CN:
11-3342/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室
邮发代号:
2-367
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
4211
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8
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