入侵害虫梣粉虱的种特异性SS-COⅠ检测技术

• 作者: 万方浩 冼晓青 张桂芬 王玉生 邵嘉文
• 来源期刊: 生物安全学报
• 关键词: 梣粉虱 种特异性引物 检测阈值 快速鉴定 分子检测 监测
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 273-279
• 页数: 7页
• 字数: 4838字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1787.2017.04.003

摘要

[目的]梣粉虱是新近入侵中国大陆的一种危险性果树和园林植物害虫,针对其体型微小,与近缘种粉虱形态相仿,很难快速准确区分的问题,以田间常见的11种/隐种粉虱为参考,采用基于mtDNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunitⅠ,mtDNA COⅠ)基因的物种特异性(species-specific COⅠ,SS-COⅠ)PCR法,研究梣粉虱快速分子检测鉴定技术.[方法]利用mtDNA COⅠ基因通用型引物对LCO-1490/HCO-2198获得梣粉虱和其他常见粉虱的COⅠ基因序列,根据测序结果设计梣粉虱特异性SS-COⅠ引物1对(SPZWCF1/SPZWCR1),之后确定其对目的片段的扩增长度,并对该引物对的物种特异性和检测灵敏性进行检验.[结果]引物对SPZWCF1/SPZWCR1扩增片段的长度为426 bp.物种特异性检验结果显示,该对引物只对梣粉虱的mtDNA COⅠ基因具有扩增效果,对我国常见的其他种类的粉虱包括5种烟粉虱隐种(AsiaⅠ、AsiaⅡ1、AsiaⅡ3、MED、MEAM1隐种)以及桑粉虱、螺旋粉虱、黑刺粉虱、柑橘粉虱、双钩巢粉虱和温室粉虱等不具有交叉反应和扩增能力.灵敏性检验结果显示,该对引物不仅对不同性别、不同采集地的成虫具有良好的扩增效能,对2~4龄若虫以及单粒卵和初孵若虫亦具有同样的扩增效力,其最低检测阈值为75.1 pg?μL-1(相当于1/10240头雌性成虫).[结论]该技术体系可用于梣粉虱的快速准确鉴定及其检测和监测,对有效阻截其进一步传播扩散具有重要作用.