猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的MARC-145细胞中外泌体的分离与鉴定

• 作者: 姜俊兵 张亮 扆妍妍 段马魁 王帅帅 范阔海 陈忍霞 陶佳丽
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: MARC-145细胞 外泌体 PRRSV粒子 速率区带离心 免疫磁珠
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1300-1305
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.07.014

摘要

旨在寻找有效方法,能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中分离细胞产生的外泌体,并为探索外泌体在PRRSV感染细胞时的作用奠定基础.使用试剂盒提取MARC-145细胞产生的外泌体,利用电镜负染色法和Western blot技术对MARC 145细胞产生的外泌体进行鉴定;采用碘克沙醇速率区带离心分离MARC-145细胞产生的外泌体,并用Western blot技术检测外分泌体的分布区间.用PRRSV感染MARC-145细胞后,使用试剂盒对MARC-145细胞产生的外泌体进行初步分离后,采用免疫磁珠捕获技术进行进一步纯化,并使用Western blot进行验证.Western blot结果显示MARC-145细胞产生的外泌体存在特异性标记蛋白CD63 、Tsg101和Alix,不存在外泌体非标记蛋白EEA1 、GRP94和Cytochrome C;电镜负染色结果显示MARC-145细胞产生的外泌体尺寸大小处于30～100 nm,符合外泌体特征.利用Western blot对碘克沙醇速率区带离心中收集到的样品进行分析,结果显示MARC-145细胞产生的外泌体分布于7.2％～18％碘克沙醇密度区间.Western blot结果显示免疫磁珠捕获法获得的对照组不存在外泌体标记蛋白Tsg-101.以上结果表明MARC-145细胞能够产生外泌体,并且通过免疫磁珠捕获法能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中将其分离.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜俊兵	山西农业大学动物科技学院	51	333	10.0	16.0
2	范阔海	山西农业大学动物科技学院	27	65	5.0	7.0
3	陶佳丽	山西农业大学动物科技学院	7	6	2.0	2.0
4	张亮	山西农业大学动物科技学院	7	6	2.0	2.0
5	段马魁	山西农业大学动物科技学院	5	5	2.0	2.0
6	扆妍妍	山西农业大学动物科技学院	4	23	2.0	4.0
7	王帅帅	山西农业大学动物科技学院	1	3	1.0	1.0
8	陈忍霞	山西农业大学动物科技学院	1	3	1.0	1.0