聚乙二醇重组人促红细胞生成素在食蟹猴体内的药代动力学检测方法

• 作者: 刘海峰 孙云霞 庞甲佩 徐楠楠 李开通 汪宁 肖琳琳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 聚乙二醇重组人促细胞生成素 双抗体夹心酶联免疫吸附法 药代动力学
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 828-833
• 页数: 6页
• 分类号: R969.1
• 字数: 3194字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.022

摘要

目的:建立2种灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以检测食蟹猴血浆中的聚乙二醇重组人促细胞生成素(EP0)含量.方法:建立了2套双抗夹心的ELISA方法对聚乙二醇重组人EPO进行定量,包括PEG特异性ELISA(检测完整药物)及EPO特异性ELISA(检测总EPO).完整药物检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的生物素标记的兔抗PEG单抗(检测抗体)及链亲和素-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D450/600nm值.总EPO检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的兔抗重组人EPO多抗-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D450/600nm值.结果:建立并验证了2套ELISA方法,定量范围均为4～54 ng/mL,定量下限均为4 ng/mL,准确度和精密度(板内和板间)均在±15％之内(总EPO检测时以聚乙二醇重组人EPO为标准品),同时室温稳定性、冻融稳定性、长期稳定性及稀释线性(空白猴血浆稀释)均良好.结论:方法学确证表明,2套ELISA方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量测定食蟹猴血浆中聚乙二醇重组人EPO的浓度.