应用荧光原位杂交技术检测康柏西普基因在CHO细胞染色体上的整合状态

• 作者: 师明磊 易天红 柯潇 赖维莉 赵志虎
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: 荧光原位杂交 康柏西普 CHO工程细胞 基因组整合
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 326-332
• 页数: 7页
• 字数: 4944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.16-335

摘要

CHO细胞是常用的哺乳动物表达工程细胞.外源基因整合至CHO细胞染色体后,在大规模蛋白质生产过程中,由于相关压力撤除,外源基因存在丢失的可能,因此有必要对其整合稳定性进行检测.康柏西普(conbercept)是一个能够特异性结合VEGF-A的各种异构体、VEGF-B以及PlGF,从而发挥抗血管生成活性的融合蛋白.康柏西普目前已在美国进入Ⅲ期临床试验.本文运用荧光原位杂交对康柏西普基因在CHO细胞的整合状态进行了检测,发现经过4和19次传代后,康柏西普基因依然能稳定整合在基因组上,并且呈现出3个特点:(1)分布在一条染色体上,而不是多条染色体上;(2)分布在较长的染色体上;(3)在同一染色体上有较多拷贝数.同时,荧光定量PCR结果证明基因拷贝数无明显改变,ELISA检测证明蛋白表达水平亦无明显改变.上述实验证明在经过19次传代以后,康柏西普基因仍然稳定整合在基因组中,并可活跃表达,为康柏西普大规模生产及产品质控提供了有力依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵志虎	军事医学科学院生物工程研究所	48	447	11.0	20.0
2	师明磊	军事医学科学院生物工程研究所	17	69	5.0	7.0
3	柯潇		29	57	5.0	6.0
4	赖维莉		2	1	1.0	1.0
5	易天红		2	1	1.0	1.0