靶向人CHOP基因shRNA真核表达载体的构建

• 作者: 吴欣芳 段冷昕 王建刚 赵亚飞 高杨
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: CHOP RNA干扰 shRNA 真核表达载体 内质网应激
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 103-107,204
• 页数: 6页
• 分类号: R575.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.02.0017

摘要

[目的]构建靶向干扰内质网应激标志性因子CHOP的shRNA真核表达载体,并检测其对CHOP的干扰效率.[方法]查询GenBank数据库,获取人源CHOP基因mRNA的序列,按照小干扰RNA(siRNA)靶序列的设计原则,设计并构建靶向CHOP基因mRNA的4个特异性shRNA真核表达载体(shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4)和1个无同源性的阴性对照载体(shRNA-NC),经PCR和测序鉴定确认shRNA载体构建成功后,脂质体转染人正常肝细胞系(L-02),Western Blot法检测CHOP蛋白的表达,筛选出干扰效果最好的表达载体.[结果]PCR和测序结果显示,5个shRNA表达载体均构建成功.Western Blot结果显示,0.06 g/L衣霉素损伤24h后,与内质网应激模型组相比,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组的CHOP蛋白表达水平均明显降低(P＜0.01),其中shRNA-1和shRNA-4组CHOP干扰效果最明显.[结论]构建了并成功筛选出靶向干扰CHOP基因的真核表达载体,为深入研究CHOP介导内质网应激所致细胞凋亡的信号通路奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建刚		93	547	12.0	19.0
2	段冷昕		28	168	8.0	11.0
3	赵亚飞		6	11	3.0	3.0
4	高杨		10	22	3.0	4.0
5	吴欣芳		5	14	3.0	3.0