纳米荧光素酶的表达、纯化及性质鉴定

• 作者: 丁澦 侯家鹏
• 来源期刊: 云南农业大学学报（自然科学）
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳米荧光蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 191-196
• 页数: 6页
• 分类号: Q617
• 语种: 中文
• DOI: 10.16211/j.issn.1004-390X(n).2017.02.001

摘要

由荧光素酶(luciferase)催化的一大类发光反应被统称为生物发光(bioluminescence),该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点,是高灵敏检测的发展方向之一.课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶(nano luciferase),研究清楚了其理化性质的基础上,将其作为一种新型的生物发光检测工具.将荧光素酶基因克隆至原核高表达载体上,通过自动诱导系统进行了表达.通过Ni-NTA亲和层析纯化和分子筛将重组纳米荧光素酶进行纯化,其产量可稳定达到每升菌25.3 mg,纯度超过98％;通过酶活实验鉴定了纳米荧光素酶的活性,在1.0 ×10-4 ～ 1.0 ×10-7 mg/mL的范围内,该酶均具有良好的线性反应,其线性检测下限低至1.0 ×10-7 mg/mL(约5pmol).纳米荧光素酶具有灵敏度高、数据重复性好、操作简便、稳定性高、易于保存等多重优点,可利用其作为基础平台,开发具有应用前景的超灵敏新型生物发光探针.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁澦		7	1	1.0	1.0
2	侯家鹏		1	0	0.0	0.0