东南景天叶肉细胞原生质体和液泡的分离与纯化技术

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 关键词: 超积累植物 东南景天 原生质体 液泡 提取与纯化
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 页码范围: 85-88
• 页数: 4页
• 语种: 英文
• DOI: 10.1631/jzus.B1600138

摘要

目的：在超积累植物东南景天对镉的区隔化过程中，叶肉细胞等内含大型液泡的薄壁细胞起重要作用。本文旨在建立并优化其叶肉细胞原生质体和液泡的提取和纯化技术，在技术层面上为东南景天的镉区隔化机理研究奠定基础，有助于深入探明其超积累镉的生理与分子机理。创新点：优化了东南景天叶片原生质体的提取和纯化技术，并建立了能较高效率获得膜完整性好、数量多、纯度高的液泡提取方法。方法：主要包括原生质体提取、液泡粗提和液泡纯化。原生质体提取：取东南景天叶片，切成1~2 mm的细条状后浸入经预热过的细胞裂解液中，震荡2 h后过滤，离心清洗后获得原生质体。液泡粗提：采用1-丙磺酸浓度为0.675 mmol/L的原生质体裂解液裂解原生质体，离心后获得粗提的液泡，并加入含0.8 mol/L甘露醇的液泡保护液。液泡纯化：往初提液泡的悬浮液下层加入质量体积比浓度为0.10 g/ml的Ficoll溶液，进行密度梯度离心，获取纯化的液泡。结论：细胞裂解液的预热处理可加速细胞壁降解，裂解时间设置为2 h有利于原生质体的高效提取；通过对原生质体裂解液浓度、细胞保护液浓度和梯度离心等参数的改良，可有效提取叶片细胞原生质体中的液泡。