紫花苜蓿MsLEA4-4基因的克隆、表达分析及遗传转化

• 作者: 刘建宁 吴欣明 王学敏 王运琦 石永红 董宽虎 贾会丽 郭继承 高洪文
• 来源期刊: 草业学报
• 关键词: 紫花苜蓿 胚胎晚期富集蛋白(LEA) 逆境胁迫 遗传转化
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 108-116
• 页数: 9页
• 字数: 6323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb2017202

摘要

胚胎晚期富集蛋白(LEA)广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应.本研究利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆了一个LEA4类基因的开放阅读框(ORF),命名为MsLEA4-4.该基因编码512个氨基酸,结构分析显示MsLEA4-4包含5个重复的由11个氨基酸TAQAAKEKTQQ组成的序列特征.利用实时荧光定量PCR检测了MsLEA4-4在不同逆境下的表达量,结果显示,该基因受干旱、NaCl、Cu2+、Zn2+和外源ABA诱导表达上调,其中NaCl胁迫2h、Cu2+和Zn2+胁迫8h,MsLEA4-4基因表达量最高;冷胁迫和干旱胁迫下,该基因的表达量随处理时间的延长呈逐渐上升趋势,表明该基因可能参与了紫花苜蓿的抗逆性调控.构建植物超表达载体pCAMBIA3301-MsLEA4-4,采用农杆菌介导法侵染拟南芥花序,通过草铵膦(PPT)筛选和分子检测,7株抗性苗呈阳性,表明目的基因已成功导入拟南芥基因组中.本研究为进一步探索MsLEA4-4基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础.