Cas9稳定表达人肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性

• 作者: 冯海凉 刘玉琴 卞晓翠 孙昊 李姜 杨振丽 赵晓梅 顾蓓
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 关键词: 细胞系,肿瘤 基因编辑
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 43-48
• 页数: 6页
• 字数: 4934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2017.01.010

摘要

目的：建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株，验证细胞中Cas9的基因编辑活性，方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株；在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA，挑选单克隆，通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。