肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

• 作者: 刘佳 李培峰 李孟鹏 林志娟 王建勋 陈潇 陈超
• 来源期刊: 转化医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肌细胞增强因子2D 有丝分裂诱导基因6 肝细胞癌 负向调控 细胞增殖 细胞迁移
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: ?分子标志物?
• 页码范围: 6-11,15
• 页数: 7页
• 分类号: Q522|R329.2+8|R735.7
• 字数: 4484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-3097.2017.01.002

摘要

目的：观察肌细胞增强因子2D( myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6( mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图；用小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK)和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力；用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照( negative control,NC)组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M(同时下调MIG6和MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系(r＝－0.78)。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化。72 h 时,各组间方差分析差异有统计学意义( F＝20.68、P<0.01)；下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度( optical density, OD)值为3.73±0.18,t＝3.84、P＝0.02]；下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降(OD＝1.79±0.22,t＝3.95、P＝0.02)；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强(OD＝2.99±0.03,t＝4.83、P<0.01)。细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义( F＝42.27、P<0.01)；48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为(51±4)％,t＝3.22、P<0.05)]；下调 MEF2D 后,与 NC 组比较,siMEF2D 组中 PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为(19±3)％,t＝7.70、P<0.01]；同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为(46±3)％,t＝6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测,下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞MIG6蛋白表达水平显著上升( t＝7.86、P<0.001)；上调MEF2D后,与空载对照组比较,MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降( t＝4.61、P＝0.004)。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系,MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘佳	青岛大学药学院	47	129	7.0	10.0
2	王建勋	青岛大学转化医学研究院	6	11	2.0	3.0
3	陈潇	青岛大学转化医学研究院	5	1	1.0	1.0
4	陈超	青岛大学转化医学研究院	6	41	2.0	6.0
5	林志娟	青岛大学转化医学研究院	2	1	1.0	1.0
6	李孟鹏	青岛大学转化医学研究院	1	0	0.0	0.0
7	李培峰	青岛大学转化医学研究院	4	1	1.0	1.0