快速鉴定B群链球菌及检测其耐药性方法的建立和初步应用

• 作者: 何其励 张丽华 朱学海 杨维青 王欣 郭主声 陈军剑 黄娟
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 多重聚合酶链式反应 B群链球菌 耐药基因 快速鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1+2
• 字数: 4301字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2017.04.006

摘要

目的 建立快速鉴定B群链球菌(group BStreptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用.方法 建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfd、大环类脂类耐药基因ermB和mefA/E、克林霉素耐药基因linB.对该方法的引物质量浓度、Taq酶量和退火温度进行优化,确定多重PCR最适反应体系及最低检测限;将该方法用于91株GBS临床菌株的鉴定及其耐药性的检测,并评价其与常规PCR方法结果的一致性.结果多重PCR的最适反应体系,总量25 μL:多重PCR mix212.5 μL、多重PCR mix1 Taq酶0.23 μL、linB-F和linB-R引物0.4μmol/L、mefA/E-F和mefA/E-R引物0.2μmol/L、ermB-F和ermB-R引物0.12 μmol/L、cfd-F和cfb-R引物0.08 μmol/L、DNA 10 ～100 ng、不足量补入无菌去离子水.扩增程序为:94℃预变性60 s;94℃变性30 s、53℃退火90 s、72℃延伸30 s,共30个循环;72℃延伸10 min.最低检测限为20 pg/μL.多重PCR方法与常规PCR方法检测91株GBS临床菌株,cfd基因结果一致率为100％,ermB、mefA/E和linB基因的Kappa值分别为0.938、0.956和0.935.结论 建立的以GBScfb、ermB、mefA/E和linB基因为检测位点的多重PCR方法,可在鉴定GBS的同时检测其对克林霉素、红霉素的耐药性.