斑马鱼心脏发育候选基因Titin-Cap的CRISPR/Cas9打靶有效性分析

• 作者: 万永奇 吴秀山 尹丽阳 彭亚欣 李永青 漆轲婧 罗世锋 袁月亲 颜尔聪
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 心脏发育 斑马鱼 CRISPR/Cas9 Titin-Cap基因
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 458-465,457
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 字数: 4067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2017.05.012

摘要

CRISPR/Cas9基因打靶技术是近几年发展起来的一种高效率的定向打靶技术,被认为是遗传领域的革命性技术.Titin-Cap基因是本实验室已初步鉴定的斑马鱼心脏发育候选基因,且国内外目前尚无斑马鱼Titin-Cap基因的敲除品系.为了研究Titin-Cap基因在心脏发育过程中的作用机制,我们利用CRISPR/Cas9基因打靶技术建立斑马鱼Titin-Cap基因的敲除品系.测序结果显示,注射了CRISPR/Cas9 gRNA的胚胎出现双峰,说明在打靶位点附近出现了碱基缺失或插入,证明我们设计的gRNA是有效的.对F0代突变体成鱼的筛选中,测序结果同样显示有阳性结果.这些结果说明用CRISPR/Cas9基因打靶技术成功敲除了斑马鱼Titin-Cap基因,获得了Titin-Cap基因敲除的嵌合体斑马鱼.