小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 冯向辉 孔汉金 孙明 张丽 杨璐 田新生 申屠芬琴 陈三民 陈西钊
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 N蛋白 表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 75-79
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+9.2
• 字数: 4104字
• 语种: 中文

摘要

将编码小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的基因全长克隆到pBacPAK9载体中,并在昆虫细胞中进行表达.对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用PPRV阳性血清进行了Westem blot鉴定.用Ni-IDA亲和柱对组氨酸融合表达的N蛋白进行了纯化,并对纯化产物进行了理化性质和抗原活性分析.最后以表达的N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,临床检测137份山羊血清并与IDvet公司的商品化PPRV抗体检测试剂盒进行比较.结果表明,制备的PPRV N蛋白抗原在溶液中以单体形式存在,具有非常好的抗原活性.用该蛋白建立的间接ELISA检测方法与IDvet试剂盒符合率为95.6％.本研究为小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备相关质量标准的建立奠定了基础,同时建立的ELISA抗体检测方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断.