EGFR可溶性胞外段的表达、纯化及鉴定

• 作者: 段勤勇 汪炬 赵志磊
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 目的基因 EFGR胞外段蛋白(ED-EGFR) 包涵体 可溶性表达 纯化 检测
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 377-380
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20170501

摘要

利用大肠杆菌表达表皮生长因子受体胞外段(ED-EGFR),将目的基因片段插入到pET28a载体中,将插入目的基因载体转化入BL21表达.利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导BL21表达ED-EGFR,破碎后80％的ED-EGFR为可溶性表达,其他则存在包涵体中,将菌液离心上清通过镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白样品经过胶浓度为12％ SDS-PAGE电泳,条带在相对分子质量58 k左右出现单一条带,并且纯度达到95％以上.通过BCA检测蛋白浓度,利用CCK8方法检测ED-EGFR具有较高活性,人肺非小细胞癌细胞(H1648细胞)增殖明显被抑制,并且在浓度320 ng/mL下抑制效果最好.