不同浓度Wnt-11诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化的实验研究

• 作者: 刘源 吕洋 王浩宇 王海萍 霍艳丽
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 Wnt-11 心肌样细胞 细胞分化
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 199-205
• 页数: 7页
• 分类号: R741
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201702009

摘要

目的 探讨Wnt-11体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为心肌样细胞的最适浓度.方法 采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMMSCs,取第2代BMMSCs培养48 h后进行定向诱导,根据Wnt-11终浓度的不同分为A组(100 ng/mL),B组(200 ng/mL),C组(400 ng/mL)和D组(空白对照组),诱导72 h后更换为完全培养液继续培养4周,D组仅用完全培养液培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化.运用流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物进行鉴定.各组细胞培养至第4周时,运用免疫细胞化学染色技术检测结蛋白(Desmin)、间隙连接蛋白43(Connexin43)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达情况.运用透射电镜观察分化细胞的超微结构变化.实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组细胞在诱导后培养第1、2、4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5及α-MHC的表达.结果 ①原代BMMSCs于第2周形成集落,多呈梭形、星形,少数形状不规则.传代后细胞体积变大,诱导后细胞多为长梭形,呈一致性生长.②流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物的鉴定结果显示CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.9%、0.4%和99.5%.③免疫细胞化学染色技术检测结果显示:诱导后常规培养至第4周,A组、B组、C组细胞胞质均呈阳性表达Desmin、Connexin43和cTnI,而D组细胞呈弱阳性或阴性表达,B组细胞的阳性表达率均最高,差异具有统计学意义(P<0.05).④透射电镜结果显示:各诱导组细胞于诱导后常规培养至第4周,胞质内可见平行排列的肌丝及亚细胞结构如线粒体、粗面内质网和核糖体.⑤RT-qPCR检测结果显示:BMMSCs经诱导后,常规培养第1周时各诱导组细胞均表达GATA-4及Nkx2.5基因,在第2周时表达减弱,在第4周时表达增强,就基因表达而言,三个诱导组相比较,B组明显优于其他两组(P<0.05).α-MHC基因在诱导后常规培养期间均不表达.对照组细胞在常规培养期间GATA-4及Nkx2.5基因的表达量为1,而不表达α-MHC基因.结论 Wnt-11可在体外诱导SD大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化最适浓度为200 ng/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海萍	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	35	126	6.0	9.0
2	吕洋	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	53	206	8.0	10.0
3	霍艳丽	河北北方学院人体解剖学教研室	19	47	4.0	6.0
4	王浩宇	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	25	103	6.0	9.0
5	刘源	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	4	15	2.0	3.0