肿瘤相关成纤维细胞中GPER介导HMGB1外分泌促进乳腺癌MCF-7细胞自噬及增殖

• 作者: 余腾骅 尹恒 张光君 柳满然 涂刚 郭林英
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 G蛋白偶联雌激素受体 HMGB1蛋白 细胞自噬 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 448-456
• 页数: 9页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2017.11.072

摘要

目的:探讨小分子化合物G1活化微环境肿瘤相关成纤维细胞(cancerassociated fibroblast,CAF)中G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对外分泌细胞因子高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的影响,以及对乳腺癌MCF-7细胞自噬和增殖能力的影响.方法:构建靶向干扰GPER基因的GPER-shRNA慢病毒,稳定转染至CAF中;分别采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测阴性对照慢病毒感染组(CAF-shNC组)与GPER-shRNA慢病毒感染组(CAF-shGPER组)中GPER mRNA和蛋白的表达情况.利用GPER特异性激动剂G1 (1μmol/L)处理以上2组细胞后,分别得到G1+CAF-shNC组与G1+CAF-shGPER组细胞;应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及ELISA法检测上述4组细胞中细胞因子HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平,以及条件培养液中HMGB1的分泌量.收集以上各组细胞的条件培养液处理MCF-7细胞后,应用蛋白质印迹法检测肿瘤细胞自噬蛋白标志物Beclin1、p62及LC3的表达情况,CCK-8法检测对MCF-7细胞增殖能力的影响.结果:携带有GPER-shRNA的慢病毒稳定转入CAF后,GPER mRNA及蛋白的表达水平被明显抑制(P值均＜ 0.01).GPER特异性激动剂G1可明显上调CAF-shNC组细胞中细胞因子HMGB mRNA及蛋白的表达水平,进一步上调条件培养液中HMGB1蛋白的分泌量(P值均＜0.05).在G1+CAF-shGPER组,中以上效应则被明显抑制.外分泌至条件培养液中的HMGB1可通过上调Beclin1和LC3蛋白以及降低p62蛋白的表达水平增强乳腺癌MCF-7细胞的自噬水平及其增殖能力(P值均＜0.01).结论:小分子化合物G1通过活化微环境CAF中GPER,增加细胞因子HMGB1的分泌量,进而诱导乳腺癌MCF-7细胞发生自噬,保护MCF-7细胞并促进其生长.