口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立及其应用评价

• 作者: 严谨 别明江 李明远 杨靖 王保宁 王红仁 王馨田 祝捷 谢艳
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 唾液 幽门螺杆菌 基因 定量检测
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 分类号: R573.6
• 字数: 3823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2017.01.004

摘要

目的 建立一种通过口腔唾液的特异、灵敏测定幽门螺杆菌核酸DNA的荧光定量PCR方法,并对其进行临床比对评价,为快速、准确、无创检测幽门螺杆菌感染提供新方法.方法 以高度保守的幽门螺杆菌16s rRNA序列为靶序列设计引物,经Blast软件对相似序列比对后,筛选出一对最优并与常见胃肠道细菌无交叉反应的引物;用荧光定量PCR扩增,对引物的退火温度及反应体系进行优化,确立反应条件;用已知菌落数(CFU/ml)的幽门螺杆菌菌悬液与唾液混合,梯度稀释扩增测试后进行灵敏度分析,建立幽门螺杆菌菌落数(CFU/ml)和荧光定量PCR循环数(Ct)关系的标准曲线;用乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌的基因进行特异性分析;利用此方法对150例来自临床胃镜中心的已完成尿素酶(URT)测定,并自愿参加研究者的口腔唾液标本进行收集检测,结果与同一病人的14C呼气实验检测结果进行比对分析,计算阳性率、阴性率和符合率.结果 本检测方法的引物退火温度是62℃,反应体系10μl;对幽门螺杆菌的检测敏感度为102 CFU/ml;本检查与乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌无交叉反应;本方法与14C呼气实验检测结果比较灵敏度74.12％,特异度86.15％,符合率79.33％,Kappa值为0.59.结论 建立了口腔唾液幽门螺杆菌基因检测的分子诊断方法;该方法的特异性好,灵敏度高,为临床检测口腔幽门螺杆菌提供了一个无创、方便的新方法.