全基因测序分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌利奈唑胺耐药相关变异位点

• 作者: 余治健 刘晓军 姚伟明 李多云 王红燕 程航 蒲彰雅 邓向斌 邓启文 郑金鑫 陈重
• 来源期刊: 中国感染控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 利奈唑胺 高通量测序 全基因组序列
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R378.1+1
• 字数: 3659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-9638.2017.01.001

摘要

目的 通过全基因组测序研究利奈唑胺(LZD)敏感株和诱导耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)之间基因变异位点差异,了解LZD耐药基因变异位点.方法 采用不同浓度梯度的LZD对遗传背景清晰的MRSA-MS4母株进行诱导,获得LZD耐药菌株MRSA-MS4-LZD100,测定最低抑菌浓度(MIC),采用普通聚合酶链反应(PCR)扩增MRSA-MS4-LZD100 23S rRNA V区及核糖体蛋白L3/L4基因,测序后与野生株比较,获得相应的突变位点;采用Illumina HiSeq 2000测序技术对样品DNA进行paired-end(PE)测序,构建Illumina PE文库,利用生物信息学完成该菌株的全基因组测序.结果 经过32代诱导,获得MRSA-MS4-LZD100菌株,其LZDMIC为96 μg/mL.PCR测序分析提示其V区多拷贝基因均存在G2447T突变,L3蛋白存在Gly113Val突变;全基因组包含2 744 315 bp碱基对,注释后共有2 509个基因,11个tRNA编码基因,以及2个完整的rRNA基因编码操纵子,获得PubMed全基因序列号(JXMJ00000000);共找出101个SNP和6个Small indel突变,发生于外显子的SNP占16个,SNP后导致氨基酸序列改变的蛋白质包括IstB ATP结合区域包含蛋白、凝集因子A及转座子IS1272等,而发生于外显子的Small indel占3个,Small indel突变后导致氨基酸序列改变的蛋白质包括假设蛋白、30S核糖体蛋白S1、凝集因子A.结论 经LZD诱导获得LZD耐药MRSA-MS4-LZD100菌株,测序分析提示该菌株存在除23S rRNAV区及L3蛋白基因以外的突变位点,为进一步研究隐性LZD耐药机制指明了方向.