鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达

• 作者: 李雯 陶妍
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 鲤鱼 g型溶菌酶 毕赤酵母 重组表达
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 81-88
• 页数: 8页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2017.01.013

摘要

从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5′和3′端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h,获得重组体CLYG.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示,在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.