黑曲霉纤维二糖水解酶基因cbhA在毕赤酵母中异源表达

• 作者: 李梦菲 杨洪江 秦慧彬
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉 纤维二糖水解酶A 毕赤酵母 异源表达
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 330-336
• 页数: 7页
• 分类号: Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.04.0054

摘要

[目的]对黑曲霉纤维二糖水解酶cbhA基因进行了克隆和在毕赤酵母中的真核表达.[方法]采用PCR方法扩增黑曲霉纤维二糖水解酶A(Cellobiohydrolase A,CBHA)基因,获得的DNA序列与cbhA基因表现出高度相似,推导出的氨基酸序列与真菌CBHA酶也高度相似,属于糖基水解酶第7家族.将扩增得到的cbhA基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,与α-因子信号肽序列形成融合蛋白,进一步通过电转化方法将线性化质粒pPIC9K-cbhA转化至毕赤酵母GS115菌株进行表达.[结果]在甲醇诱导下,重组菌株CMC比酶活力是对照的2.5倍,SDS-PAGE分析结果也确认了cbhA基因在重组菌株GS115/pPIC9K-cbhA中的表达.对该酶性质的分析表明,重组CBH酶水解CMC底物最适pH值为5.0,最适温度为55℃.[结论]黑曲霉纤维二糖水解酶基因cbhA的克隆和其真核表达工程菌株的构建,为获得纤维二糖水解酶A高产菌株,实现纤维素酶多组分的人工组装奠定了基础.