半滑舌鳎食欲素B的体外重组制备与生物活性分析

• 作者: 史宝 宋雪松 张凯 徐永江 李斌 柳学周 王滨
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 Orexin B 原核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 页码范围: 1374-1382
• 页数: 9页
• 分类号: S917.4
• 字数: 5691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20160810504

摘要

为了认识食欲素(orexin)编码的多肽orexinB对半滑舌鳎摄食的调控作用及机制,利用原核表达载体pET-32a成功构建了重组半滑舌鳎orexin B/pET-32a质粒,转化至大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸分子标签的orexinB重组蛋白.重组蛋白大小为21.14 ku,在温度37℃条件下以1.0 mmol/L的IPTG诱导6h的orexinB重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的43.5％,并主要分泌于上清液中.Western blotting免疫印迹表明,获得的orexinB重组蛋白可被6×His抗体特异性识别.Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎orexinB重组蛋白.离体孵育实验表明,orexinB重组蛋白能促进下丘脑神经肽Y(NPY肽)的分泌和NPY,orexin mRNA的表达,表明获得的重组蛋白在激素和基因水平上调控下丘脑摄食相关神经肽的表达,具有明显的生物活性.研究结果可为半滑舌鳎orexinB蛋白的批量制备及高效促食生物制剂的研制提供技术支撑.