重组大肠杆菌全细胞催化合成莱鲍迪苷D

• 作者: 李建华 杨玉凤 杨靖亚 王勇 费理文 郝千里
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 甜菊糖 莱鲍迪苷D EUGT11 重组大肠杆菌 全细胞催化
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 字数: 6047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2017.05.001

摘要

莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)是一种稀有具有高甜度的甜菊糖苷类化合物.本文实现了重组大肠杆菌全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)合成RD.以水稻cDNA为模板,扩增得到葡萄糖基转移酶基因eugt 11,构建了重组菌株E.coli BL21(pETDuet-eugt 11),并成功表达了重组蛋白6His-EUGT11.通过Ni柱亲和层析纯化并在体外酶催化反应表征了其催化活性.将重组菌BL21(pETDuet-eugt11)应用于催化合成RD研究.探讨了反应体系pH、温度、柠檬酸钠浓度、菌体密度、二价金属离子、二甲苯体积分数、UDPG添加浓度对反应效率的影响.单因素考察结果显示,在菌体密度0.16g湿细胞/mL反应液,底物RA浓度为1.0 mmol/L,pH 8.0,60 mmol/L柠檬酸钠,1％二甲苯,0.1 mmol/L ZnC12,12.0 mmol/L UDPG,反应温度42℃,反应时间24 h的条件下,RD产量为123.6 mg/L(约0.1 mmol/L).