中华鳖vasa基因克隆及在卵母细胞中的表达分析

• 作者: 张飘逸 徐红艳 朱新平 李伟 洪孝友 陈昆慈
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: vasa 中华鳖 生殖细胞 卵子发生
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 306-313
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 6899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2017.37

摘要

研究利用中华鳖为研究模型进行爬行类生殖细胞发育分化成熟等生物学研究,克隆了中华鳖vasa基因的cDNA序列,全长3865 bp,包括5′端非编码区90 bp,3′端非编码区1699 bp,开放阅读框长2076 bp,共编码691个氨基酸.中华鳖Vasa氨基酸序列包含DEAD-box家族蛋白8个保守保守功能域,在N末端有4个RGG重复序列和2个GG富集区,与小鼠Vasa蛋白的同源性较高(72%).荧光定量PCR的结果表明,中华鳖vasa mRNA主要精巢和卵巢中表达,其他体组织中均难检测到表达.卵巢冰冻切片原位杂交结果显示:中华鳖vasa mRNA在生殖细胞中特异表达;在卵子发生过程中的不同发育期卵母细胞中呈现动态的变化.即vasa mRNA在初级卵母细胞及生长期卵母细胞中表达最强,且均匀分布在细胞质中,随着卵母细胞的逐渐增大,信号逐渐减弱,直至在成熟的卵母细胞中几乎检测不到表达信号,说明vasa可能在中华鳖早期卵母细胞发育中起重要作用.同时,vasa基因可作为中华鳖生殖细胞分子标记物,根据其mRNA的表达水平来鉴别不同发育时期的卵母细胞.研究结果为进一步开展中华鳖胚胎生殖细胞发育及配子生成,特别是研究中华鳖,乃至爬行类原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)的起源、迁移、分化等研究奠定了基础.