抗EGFRvⅢ单链抗体间接ELISA方法的建立及条件优化

• 作者: 兰燕宇 刘亭 孙佳 宋菲 杨健 杨友辉 王爱民 薛维娜
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: EGFRvⅢ ELISA 条件优化 BSA 方法学验证
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 342-348
• 页数: 7页
• 分类号: Q511
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.04.0056

摘要

[目的]以合成抗原EGFRvⅢ-BSA作为被检测物,建立检测抗EGFRvⅢ单链抗体的间接ELISA检测方法并优化其反应条件.[方法]利用N-马来酰亚胺甲基环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)将EGFRvⅢ与BSA偶联制备抗原.利用方阵滴定法对间接ELISA法的抗原包被浓度,单链抗体的稀释度、包被时间和温度、包被液、抗His-tag多抗稀释度和酶标抗体的稀释度进行优化,并对建立的间接ELISA方法的方法学进行验证.[结果]通过SDS-PAGE电泳和全波长紫外扫面显示EGFRvⅢ-BSA合成成功.用PBS于37℃包被1.25 μg/mL的EGFRvⅢ-BSA 2 h,加入19.044 μg/L的ChiMR1、1:8 000的兔抗His-tag多抗和1:10 000酶标抗体可获得最佳ELISA检测结果.应用优化后的条件检测4.761 ～ 152.35 μg/L范围内的ChiMR1显示线性良好.线性方程为y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D(A:1.99706;B:-1.09760;C:35.54885;D:0.01558),R2=0.99923;60 μg/L和20 μg/L的质控品的检测精密度分别为7.142％和4.828％;准确度分别为91.8％和82.90％,准确度和精密度良好.[结论]建立的间接ELISA方法的线性、准确度和精密度良好,为临床疾病的检测奠定良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王爱民		29	21	2.0	4.0
2	杨友辉		4	0	0.0	0.0
3	杨健		4	0	0.0	0.0
4	宋菲		5	1	1.0	1.0
5	薛维娜		21	42	4.0	6.0
6	孙佳		14	3	1.0	1.0
7	兰燕宇		11	17	2.0	4.0
8	刘亭		19	15	3.0	3.0