肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物过表达促进心肌细胞自噬

• 作者: 李振华 杨晓 王剑 王添乐
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(Hgs) 重组腺病毒载体 心肌细胞 自噬
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 737-741
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3833字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.004

摘要

目的:构建和包装携带肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(Hgs)全长基因的重组腺病毒,并研究Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响.方法:PCR扩增Hgs全长cDNA,将其连接到pMD18-T载体上,测序确认正确后将其克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,该载体线性化后转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-Hgs;将pAd-Hgs线性化后经脂质体转染293A细胞进行Ad-Hgs病毒的包装与扩增;用得到的Ad-Hgs腺病毒感染心肌细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western 印迹、real-time PCR确认病毒感染的有效性以及Hgs过表达情况;通过Western印迹检测自噬标志物LC3的转换(LC3B-Ⅱ/LC3B-I),以分析Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响.结果:包装了携带Hgs基因的重组腺病毒Ad-Hgs;Ad-Hgs重组腺病毒感染心肌细胞后,荧光显微镜观察到明显的GFP表达;real-time PCR、Western印迹结果显示Hgs在心肌细胞中得到过表达;Western印迹结果证明,Hgs过表达导致心肌细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高.结论:通过包装携带Hgs cDNA的重组腺病毒,发现Hgs过表达促进心肌细胞自噬.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王剑	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	2	1	1.0	1.0
2	王添乐	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0
3	李振华	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0
4	杨晓	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0