马泰勒虫新疆株EMA-1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 宋瑞其 巴音查汗 张杨 王振宝 王盼举 瓦热斯·吐尔松 闻秀秀
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马泰勒虫 新疆株EMA-1 间接ELISA 抗体 诊断
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1737-1743
• 页数: 7页
• 分类号: S852.72
• 字数: 5314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.09.020

摘要

马泰勒虫裂殖子表面抗原1(EMA-1)是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一.为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法,笔者根据马泰勒虫EMA-1基因序列设计并合成引物,将新疆株EMA-1全基因序列克隆于原核表达载体pGEX-4T-1上,构建pGEX-4T-1/EMA1重组质粒,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到EMA-1融合蛋白,切胶纯化后作为包被抗原建立检测马泰勒虫抗体的rELISA方法.结果显示:①GST-EMA1蛋白相对分子质量56 ku,与其理论值基本一致;②通过Western blot分析证明其具有很好的特异性和反应原性;③以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的rELISA可明显区分马泰勒虫、驽巴贝斯虫阳性血清和健康马血清;批内和批间重复试验的最大变异系数分别为14.79％和11.06％;④使用建立的间接ELISA与cELISA商品试剂盒分别对新疆伊犁马场收集的96份马血清样品进行检测,检出阳性率分别为27.1％(26/96)和25.0％(24/96),两者总符合率为95.8％.结果表明,基于原核表达的GST-EMA1蛋白所建立的rELISA特异性、重复性好,检出率与马泰勒虫临床分离率接近,可为新疆马泰勒虫病(特别是隐性带虫马)的检测、监控提供有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴音查汗	新疆农业大学动物医学学院	150	688	13.0	17.0
2	闻秀秀	新疆农业大学动物医学学院	12	21	3.0	4.0
3	张杨	新疆农业大学动物医学学院	28	93	5.0	7.0
4	王盼举	新疆农业大学动物医学学院	8	9	2.0	3.0
5	宋瑞其	新疆农业大学动物医学学院	13	42	4.0	6.0
6	瓦热斯·吐尔松	新疆农业大学动物医学学院	8	33	4.0	5.0