平面双分子层脂质膜上人工重建大电导钙激活钾通道

• 作者: 文静 曾晓荣 李鹏云 杨艳 毛亮 程俊 谭晓秋
• 来源期刊: 生理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 平面双分子层脂质膜 涂抹法 大电导钙激活钾通道
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 305-310
• 页数: 6页
• 分类号: R33-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13294/j.aps.2017.0030

摘要

本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜(planar lipid bilayer membranes,PLBMs)的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel,BKCa)蛋白融合其上进行单通道电流研究.将卵磷脂与胆固醇氯仿按3∶1比例混合,用N2吹干氯仿,制成癸烷脂质液,采用涂抹法制备PLBMs,并将BKCa重建到PLBMs上,用膜片钳研究其单通道特性.结果显示,重建到PLBMs上的BKCa的单通道的电导值为(206.8 ±16.9) pS,当浴液中[Ca2+]=0μmol/L时,无论超极化或去极化状态下均很少见到BKCa的通道活动.膜电位为+40 mV时,当[Ca2+]由1μmol/L增加到100 μmol/L时,通道开放概率由0.034±0.002增加到0.961±0.013,平均开放时间由(1.1±0.2) ms延长到(151.3±10.2) ms,平均关闭时间由(32.2±2.8) ms缩短为(2.1±1.8) ms;当K+浓度为40/140 mmol/L (Cis/Trans)时,重建的BKCa反转电位在-30 mV左右.以上结果提示:(1)涂抹法可用于PLBMs的制备;(2)重建后的BKCa通道具有电导值大、电压依赖性、Ca2+敏感性和K+选择性;(3) PLBMs技术可用于BKCa通道的药理学和动力学特性的研究.