小G蛋白BBS3b的原核表达纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: 樊振川 王晶
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 莱茵衣藻 BBS3b 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 364-369,329
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.04.0059

摘要

[目的]制备莱茵衣藻小G蛋白BBS3b的多克隆抗体.[方法]利用莱茵衣藻bbs3b基因的cDNA序列分别构建了带有GST和6×His标签的原核表达载体pGEX-2T-BBS3b和pET-28a(+)-BBS3b并转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,以12％ SDS-PAGE鉴定.用纯化的GST-BBS3b融合蛋白免疫新西兰大白兔,采集第4次免疫后血液并分离血清,利用间接ELISA法进行效价测定,并将抗血清依次经过Protein A纯化和硝酸纤维素膜纯化,用West-ern Blotting检测抗体特异性.[结果]GST-BBS3b和6×His-BBS3b融合蛋白的分子量分别为46、20 kDa.用ELISA的方法测定抗血清效价为512 000,Western Blotting检测结果显示制备的多克隆抗体能够特异性识别莱茵衣藻BBS3b蛋白.[结论]制备的多克隆抗体效价为512 000,能够特异性识别莱茵衣藻中BBS3b蛋白,为利用莱茵衣藻作为模式生物进行BBS3b在纤毛信号传导中的作用机理研究奠定了基础.