‘红肉蜜柚’CmMYB330基因的分离与表达分析

• 作者: 余磊 吕恃衡 徐世荣 杨华丽 潘东明 潘腾飞 蔡韡韡
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: ‘红肉蜜柚’ 转录因子 CmMYB330 5'端调控序列 表达分析
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 268-278
• 页数: 11页
• 分类号: S666.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20160364

摘要

[目的]分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴.[方法]以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组分析,利用生物信息学分析和PCR技术克隆CmMYB330的编码区序列及其5’端调控序列,并对序列进行生物信息学分析.利用实时荧光定量PCR技术对CmMYB330在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析.利用农杆菌介导法将CmMYB330与GFP的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析.利用酵母双杂交系统对CmMYB330进行转录激活活性分析.[结果]CmMYB330的编码区序列长度为942 bp,编码313个氨基酸,预测为核定位蛋白,为典型的R2R3 MYB转录因子.CmMYB330与甜橙Cs1g19400.1、AmMYB330等亲缘关系近,都属于R2R3 MYB第4亚组.CmMYB330的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列,预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件,3个MBS,1个AC-I,1个5UTR Py-richstretch,还有大量激素(如赤霉素、乙烯、水杨酸等)响应元件.CmMYB330表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏,但总体呈现上升趋势,表达量在花后208 d达到最大,之后开始下降.在转化p-super 1300-CmMYB330-GFP的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号,与预测结果一致,说明CmMYB330定位在细胞核中.在Y2H Gold酵母中,CmMYB330表现为没有转录激活活性.[结论]克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子CmMYB330编码区序列及其5’端调控序列,CmMYB330属于R2R3 MYB第4亚组,与汁胞粒化相关,为核定位蛋白,同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平,总体呈上升趋势.为进一步研究CmMYB330与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础.