沉默TMEM45A基因表达可促进肾癌CAKI-1细胞的体外增殖和迁移

• 作者: 徐辉明 杨琼 王明磊 高维强
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肾肿瘤 慢病毒感染 RNA,小分子干扰 细胞增殖 细胞运动 TMEM45A基因
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 218-224,236
• 页数: 8页
• 分类号: R737.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2017.11.809

摘要

目的:探讨跨膜蛋白45A(transmembrane protein 45A,TMEM45A)基因表达对肾癌细胞CAKI-1体外增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:构建特异性针对TMEM45A基因的TMEM45A-shRNA慢病毒载体,并制备为慢病毒后感染CAKI-1细胞,沉默CAKI-1细胞中TMEM45A基因的表达.分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TMEM45AmRNA及蛋白在CAKI-1细胞中表达水平的改变.通过CCK-8法和平板克隆法检测TMEM45A基因沉默对CAKI-1细胞增殖和克隆形成能力的影响.通过Transwell小室迁移实验检测TMEM45A基因沉默对CAKI-1细胞迁移能力的影响.采用蛋白质印迹法检测TMEM45A基因沉默对CAKI-1细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称为Akt)及磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达的影响.结果:成功构建了LV-TMEM45A-shRNA慢病毒载体,并感染CAKI-1细胞株.携带有TMEM45A-shRNA的慢病毒载体转入CAKI-1细胞后,TMEM45A mRNA及蛋白的表达水平均被明显下调(P值均＜0.01);CAKI-1细胞的增殖能力明显增强(P值均＜0.01);CAKI-1细胞的迁移能力明显增强(P＜0.01).沉默TMEM45A基因表达后,CAKI-1细胞中Akt蛋白的表达水平无明显变化(P＞0.05),而p-Akt蛋白的表达水平明显升高(P＜0.01).结论:沉默TMEM45A基因的表达可增强人肾癌细胞CAKI-1的增殖和迁移能力,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K) /Akt信号转导通路的活化有关.