桑树皱叶病毒外壳蛋白基因的原核表达和抗体制备及应用

• 作者: 卢全有 孙鑫 张建平 杨磊
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桑树皱叶病毒 外壳蛋白基因 稀有密码子 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 388-394
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.46|S888.71|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2017.03.005

摘要

桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV)是近年从感病桑树中分离鉴定的一种新的桑树病毒,该病毒属于双生病毒科.由于MCLV外壳蛋白基因(cp)序列中含有较多大肠埃希菌(Escherichia mori)BL21(DE3)的稀有密码子而限制了其在大肠埃希菌中的表达.通过人工合成DNA的方法对MCLV cp基因序列进行优化,将其中40个大肠埃希菌稀有密码子变换成同义偏爱密码子,构建优化后的MCLV cp基因的原核表达载体pGEX4T-MCLV CP并转化大肠埃希菌BL21 (DE3)菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导及SDS-PAGE电泳鉴定,实现了融合蛋白GST-MCLV CP在大肠埃希菌BL21 (DE3)中高效表达.通过SDS-PAGE纯化后切胶回收原核表达的融合蛋白GST-MCLV CP,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MCLV CP的多克隆抗体,经间接ELISA法测定该抗血清的效价为1:4 096,Western blot检测其能与MCLV发生特异性反应.用制备的抗血清对MCLV感染阳性的桑叶样品进行间接ELISA检测,其检出率仅为25％,但将桑叶样品的粗汁液煮沸处理后能显著提高MCLV的检出率,检出率达83.3％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢全有		8	13	3.0	3.0
2	张建平		8	23	2.0	4.0
3	孙鑫		4	0	0.0	0.0
4	杨磊		8	3	1.0	1.0