沉默附睾P34H基因对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶活性的影响

• 作者: 丁贤胜 戴研平 马晓萍 高晓勤
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: P34 H RNA干扰 透明质酸酶
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 133-138
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2017.01.022

摘要

目的：通过慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）敲低P34H表达，分析其对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶（ HYD）活性的影响。方法：构建3种附睾精子P34H shRNA慢病毒表达载体GV－P34H－shRNA－1、GV－P34H－shRNA－2和GV－P34H－shRNA－3，提取阳性克隆质粒测序，转染HEK293T细胞，生产慢病毒颗粒。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别注入小鼠附睾中，用real－time PCR和Western blot法分别检测其对P34H mRNA和蛋白的沉默效果。采用免疫荧光法观察P34 H蛋白在小鼠精子上的定位，改良透明质酸钠－明胶底物膜法检测小鼠精子HYD活性（ HYD阳性反应率和HYD活性强度）。结果：测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功。感染小鼠附睾后，P34H的mRNA及蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低（P＜0．05）；其中以GV－P34H－shRNA－1作用最为显著，精子P34H阳性表达率和HYD活性均较阴性感染组和正常对照组明显降低（P＜0．05），而阴性感染组和正常对照组相比差异无统计学显著性。结论：附睾P34H基因沉默可抑制小鼠附睾中精子P34H阳性表达率和HYD活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高晓勤	遵义医药高等专科学校组织胚胎学教研室	49	129	7.0	8.0
2	丁贤胜	六盘水市人民医院病理科	9	14	3.0	3.0
3	马晓萍	贵州医科大学组织胚胎学教研室	22	68	5.0	7.0
7	戴研平	贵州医科大学组织胚胎学教研室	17	17	3.0	3.0